对母种进行扩繁需要制作培养基，需要的材料有：马铃薯、琼脂、葡萄糖和水。制作培养基的水很重要，因为水的PH值直接决定培养基的PH值，所以要使用PH检测仪检测水的PH值，保证水的PH值在7—8之间。
培养基制作
选择质量好的马铃薯将皮去掉，并挖去芽眼，将青绿色的部分挖掉，然后用天平称取200克马铃薯，浆洗干净切成1—2毫米的薄片，把切好片的马铃薯放入锅中，加入1000毫升的清水进行加热。
沸腾后要小火保持30分钟，然后采用7层纱布进行过滤，留取的马铃薯汁为1000毫升，如果滤液不足，采用纯净水补齐。将过滤后马铃薯汁倒入锅中继续加热，称取20克琼脂倒入锅中，不停地搅拌，等琼脂完全溶化时称取20克葡萄糖放入锅中，沸腾之后把煮好的溶液放入容器内在分装到试管里。
因为母种培养基的温度降到40摄氏度以下时会凝固，所以配制的母种培养基要乘热尽快分装试管。采用塑料烧杯进行分装，使每支分装试管的装量相当于试管长度的四分之一左右。分装好后还要进行封口，可以用未经脱脂的原棉，塞入的松紧度以用手抓棉塞不脱落为标准，棉塞塞入试管的部分约为2厘米左右。
在试管上盖上一层牛皮纸，牛皮纸的作用是防止灭菌时产生的冷凝水沾湿棉塞，甚至流进试管里，然后用橡皮筋把试管扎成捆，这样做是为了防止试管在高压锅中加热时倾倒，随后把试管放入高压锅中进行灭菌，灭菌时高压锅的压力达到0.05兆帕时放气，使压力表回归到0时使压力锅再次升压，压力上升到0.1兆帕并维持30分钟，这样的压力下高压锅的温度一般在120摄氏度左右。
加热停止后等温度降止常温时在打开高压锅，取出试管，灭菌后的试管乘热放在摆斜面的架子上，让试管保持倾斜，将倾斜保持在20度，以培养基占试管的三分之二为标准。大约半个小时以后，由于琼脂的凝固作用试管中的培养基就凝固了，母种培养基就做好了。
